Titre : | Validation d’un protocole d’isolement de cellules sanguines périphériques mononucléées en vue de l’étude de la fonction mitochondriale chez le cheval | Type de document : | TFE | Auteurs : | Flo Paquay, Auteur | Editeur : | Angleur : HELMo Sainte-Julienne | Année de publication : | 2019 | Importance : | 39 p. | Présentation : | ill. en coul. | Note générale : | TFE (Travail de fin d'études) -- Bachelier-Technologue de laboratoire médical -- HELMo Sainte-Julienne, Angleur, 2019 | Langues : | Français (fre) | Mots-clés : | Cellules sanguines périphériques mononucléées (PBMC) Milieu à gradient de densité Comptage cellulaire Fonction mitochondriale Oxygraphie | Résumé : | Au sein de la Faculté de Médecine vétérinaire de l’Université de Liège, j’ai travaillé sous la supervision du Docteur Dominique Votion, chercheuse dans le domaine de la médecine vétérinaire équine, et de Caroline Kruse, doctorante dans le service de Physiologie. L’objectif de mon travail était de valider un protocole d’isolement de cellules sanguines périphériques mononucléées, ou PBMC, en vue d’étudier la fonction mitochondriale chez le cheval.
L’étude de la fonction mitochondriale a été précédemment validée sur des micro-biopsies musculaires équines ainsi que sur des cellules sanguines humaines. La fonction mitochondriale des cellules sanguines périphériques mononucléées équines est d’un intérêt majeur pour la médecine vétérinaire équine grâce à la facilité d’obtention d’un prélèvement. En effet, une prise de sang est moins invasive qu’une micro-biopsie musculaire et constitue un acte plus facilement acceptable par le propriétaire de l’animal. L’utilisation des PBMC n’ayant pas encore été réalisée chez le cheval en vue d’analyser la fonction mitochondriale, il était indispensable d’établir un protocole d’isolement valable.
Afin d’atteindre l’objectif de mon travail de fin d’études, plusieurs paramètres étaient à établir tels que (1) le nombre minimum de cellules qu’il fallait obtenir afin d’effectuer une oxygraphie (2), le nombre de tubes de sang nécessaire pour atteindre cette quantité (3), le pourcentage de viabilité cellulaire acceptable (4), le milieu à gradient de densité le plus adéquat et (5), le protocole permettant d’obtenir le meilleur rendement en évitant au mieux la contamination plaquettaire.
Au terme du stage, un protocole final d’isolement des PBMC équines répondant aux critères précédemment mentionnés et permettant d’étudier, par la suite, leur fonction mitochondriale a été établi. Dans ce protocole, un tube de sang, collecté sous anticoagulant, en utilisant le Lymphoprep™ comme milieu à gradient de densité permet d’isoler de 0,5 x 106 à 1 x 106 PBMC/ml de sang entier dont le taux de viabilité est de plus de 90%. Ce protocole permet de réaliser deux oxygraphies en collectant 8 ml de sang. | Nom de la société/Institution/Lieu de stage : | ULiège, Faculté de Médecine vétérinaire | Année académique : | 2018-2019 | Maître de Stage : | Votion, Dominique ; Kruse, Caroline | Promoteur : | Raskin, Catherine | Etudes : | Technologue de laboratoire médical |
Validation d’un protocole d’isolement de cellules sanguines périphériques mononucléées en vue de l’étude de la fonction mitochondriale chez le cheval [TFE] / Flo Paquay, Auteur . - Angleur : HELMo Sainte-Julienne, 2019 . - 39 p. : ill. en coul. TFE (Travail de fin d'études) -- Bachelier-Technologue de laboratoire médical -- HELMo Sainte-Julienne, Angleur, 2019 Langues : Français ( fre) Mots-clés : | Cellules sanguines périphériques mononucléées (PBMC) Milieu à gradient de densité Comptage cellulaire Fonction mitochondriale Oxygraphie | Résumé : | Au sein de la Faculté de Médecine vétérinaire de l’Université de Liège, j’ai travaillé sous la supervision du Docteur Dominique Votion, chercheuse dans le domaine de la médecine vétérinaire équine, et de Caroline Kruse, doctorante dans le service de Physiologie. L’objectif de mon travail était de valider un protocole d’isolement de cellules sanguines périphériques mononucléées, ou PBMC, en vue d’étudier la fonction mitochondriale chez le cheval.
L’étude de la fonction mitochondriale a été précédemment validée sur des micro-biopsies musculaires équines ainsi que sur des cellules sanguines humaines. La fonction mitochondriale des cellules sanguines périphériques mononucléées équines est d’un intérêt majeur pour la médecine vétérinaire équine grâce à la facilité d’obtention d’un prélèvement. En effet, une prise de sang est moins invasive qu’une micro-biopsie musculaire et constitue un acte plus facilement acceptable par le propriétaire de l’animal. L’utilisation des PBMC n’ayant pas encore été réalisée chez le cheval en vue d’analyser la fonction mitochondriale, il était indispensable d’établir un protocole d’isolement valable.
Afin d’atteindre l’objectif de mon travail de fin d’études, plusieurs paramètres étaient à établir tels que (1) le nombre minimum de cellules qu’il fallait obtenir afin d’effectuer une oxygraphie (2), le nombre de tubes de sang nécessaire pour atteindre cette quantité (3), le pourcentage de viabilité cellulaire acceptable (4), le milieu à gradient de densité le plus adéquat et (5), le protocole permettant d’obtenir le meilleur rendement en évitant au mieux la contamination plaquettaire.
Au terme du stage, un protocole final d’isolement des PBMC équines répondant aux critères précédemment mentionnés et permettant d’étudier, par la suite, leur fonction mitochondriale a été établi. Dans ce protocole, un tube de sang, collecté sous anticoagulant, en utilisant le Lymphoprep™ comme milieu à gradient de densité permet d’isoler de 0,5 x 106 à 1 x 106 PBMC/ml de sang entier dont le taux de viabilité est de plus de 90%. Ce protocole permet de réaliser deux oxygraphies en collectant 8 ml de sang. | Nom de la société/Institution/Lieu de stage : | ULiège, Faculté de Médecine vétérinaire | Année académique : | 2018-2019 | Maître de Stage : | Votion, Dominique ; Kruse, Caroline | Promoteur : | Raskin, Catherine | Etudes : | Technologue de laboratoire médical |
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