Titre : | Production et purification de la protéine sfGFP, clonage dans Bacillus d’un gène codant pour un anticorps anti-sfGFP et essais de production | Type de document : | TFE | Auteurs : | Clémentine Madinko Kamwa, Auteur | Editeur : | Angleur : HELMo Sainte-Julienne | Année de publication : | 2021 | Importance : | 52 p. | Présentation : | ill. couleur | Note générale : | TFE (Travail de Fin d'Etudes) -- Bachelier-Technologue de laboratoire médical -- HELMo Sainte-Julienne, Angleur, 2021 | Langues : | Français (fre) | Mots-clés : | protéine sfGFP purification production anticorps anti-sfGFP | Résumé : | Les anticorps sont des glycoprotéines constitués de deux chaînes lourdes et de deux chaînes légères. Cependant, leur utilisation dans leur forme complète est très encombrante car ils ont tendance à précipiter altérant ainsi leur stabilité dans le sérum. C’est pourquoi, afin de palier à ces problèmes, l’utilisation de nanobody est très exploitée en recherche. En effet, ces
nanobodies, sont constitués d’un seul domaine variable (VHH) dérivant des anticorps à chaînes lourdes de camélidés. Leur petite taille rend l’utilisation de ces nanobody incontournable
dans de nombreuses applications telles que le dosage immunologique et le traitement de certains cancers. Il serait dès lors très intéressant de pouvoir les produire en grande quantité.
En vue de ce contexte et des besoins actuels dans le domaine de la recherche, le but de ce travail de fin d’études est de montrer qu’on peut produire des nanobodies dans le milieu de
culture des bactéries du genre Bacillus. Le nanobody Lag-16 a été choisi comme modèle. Si ce dernier est produit de manière efficace, alors il est possible d’exprimer des milliers d’autres nanobodies via Bacillus. En effet, ces bactéries (Bacillus subtilis et Brevibacillus) sont communément utilisées pour les productions en grande quantité, elles sont efficaces pour produire des protéines qui possèdent des ponts disulfures dans leur structure et leur génétique est bien étudiée.
L’antigène reconnu par ce nanobody Lag-16 est la protéine sfGFP. Cet antigène possède de nombreux avantages tels que sa stabilité en solution, ses propriétés fluorescentes et sa
production aisée dans les bactéries de types Escherichia coli KRX. La sfGFP couplée à une molécule ou une protéine par exemple garde ses propriétés fluorescentes et permet donc de
détecter facilement la molécule ou la protéine fusionnée à la sfGFP. De plus, des études préliminaires ont déjà été menées sur cette sfGFP au sein du laboratoire d’accueil. | Nom de la société/Institution/Lieu de stage : | Centre d’Ingénierie des Protéines (CIP) | Année académique : | 2020-2021 | Maître de Stage : | Brans, Alain | Promoteur : | Lejeune, Annabelle | Etudes : | Technologue de laboratoire médical |
Production et purification de la protéine sfGFP, clonage dans Bacillus d’un gène codant pour un anticorps anti-sfGFP et essais de production [TFE] / Clémentine Madinko Kamwa, Auteur . - Angleur : HELMo Sainte-Julienne, 2021 . - 52 p. : ill. couleur. TFE (Travail de Fin d'Etudes) -- Bachelier-Technologue de laboratoire médical -- HELMo Sainte-Julienne, Angleur, 2021 Langues : Français ( fre) Mots-clés : | protéine sfGFP purification production anticorps anti-sfGFP | Résumé : | Les anticorps sont des glycoprotéines constitués de deux chaînes lourdes et de deux chaînes légères. Cependant, leur utilisation dans leur forme complète est très encombrante car ils ont tendance à précipiter altérant ainsi leur stabilité dans le sérum. C’est pourquoi, afin de palier à ces problèmes, l’utilisation de nanobody est très exploitée en recherche. En effet, ces
nanobodies, sont constitués d’un seul domaine variable (VHH) dérivant des anticorps à chaînes lourdes de camélidés. Leur petite taille rend l’utilisation de ces nanobody incontournable
dans de nombreuses applications telles que le dosage immunologique et le traitement de certains cancers. Il serait dès lors très intéressant de pouvoir les produire en grande quantité.
En vue de ce contexte et des besoins actuels dans le domaine de la recherche, le but de ce travail de fin d’études est de montrer qu’on peut produire des nanobodies dans le milieu de
culture des bactéries du genre Bacillus. Le nanobody Lag-16 a été choisi comme modèle. Si ce dernier est produit de manière efficace, alors il est possible d’exprimer des milliers d’autres nanobodies via Bacillus. En effet, ces bactéries (Bacillus subtilis et Brevibacillus) sont communément utilisées pour les productions en grande quantité, elles sont efficaces pour produire des protéines qui possèdent des ponts disulfures dans leur structure et leur génétique est bien étudiée.
L’antigène reconnu par ce nanobody Lag-16 est la protéine sfGFP. Cet antigène possède de nombreux avantages tels que sa stabilité en solution, ses propriétés fluorescentes et sa
production aisée dans les bactéries de types Escherichia coli KRX. La sfGFP couplée à une molécule ou une protéine par exemple garde ses propriétés fluorescentes et permet donc de
détecter facilement la molécule ou la protéine fusionnée à la sfGFP. De plus, des études préliminaires ont déjà été menées sur cette sfGFP au sein du laboratoire d’accueil. | Nom de la société/Institution/Lieu de stage : | Centre d’Ingénierie des Protéines (CIP) | Année académique : | 2020-2021 | Maître de Stage : | Brans, Alain | Promoteur : | Lejeune, Annabelle | Etudes : | Technologue de laboratoire médical |
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