Titre : | Evaluation de la sensibilité à la ferroptose dans les cellules d’adénocarcinome pulmonaire muté BRAFV600E après traitement au Dabrafenib et au Trametinib | Type de document : | TFE | Auteurs : | Océane Muller, Auteur | Editeur : | Angleur : HELMo Sainte-Julienne | Année de publication : | 2022 | Importance : | 42 p. | Présentation : | ill. couleur | Note générale : | TFE (Travail de Fin d'Etudes) -- Bachelier-Technologue de laboratoire médical -- HELMo Sainte-Julienne, Angleur, 2022 | Langues : | Français (fre) | Résumé : | Des résultats préliminaires obtenus au Laboratoire d’accueil ont montré que des cellules d’adénocarcinome pulmonaire muté BRAFV600E persistantes au Dabrafenib/Trametinib sont plus
sensibles à l’induction de la ferroptose que les cellules non traitées (parentales). Ces résultats ont été obtenus en exposant des cellules HCC364 à des inducteurs de la ferroptose après un traitement de 3 semaines aux inhibiteurs de BRAF et de MEK.
Le but de mon travail a été d’évaluer si la sensibilité à la ferroptose est une caractéristique générale des cellules de cancer du poumon BRAF muté après traitement au abrafenib/Trametinib.
Les objectifs de ce travail sont divisés en deux parties.
D’une part, nous avons évalué si une autre lignée de cancer du poumon BRAF muté, les cellules Piro 1D, sont également plus sensibles à l’induction de la ferroptose après traitement avec la combinaison de Dabrafenib et Trametinib que les cellules parentales.
D’autre part, nous avons étudié les potentiels mécanismes intervenant dans l’augmentation de la sensibilité à la ferroptose.
Premièrement, les cellules Piro 1D ont été traitées avec une combinaison de Dabrafenib et de Trametinib durant trois semaines afin d’obtenir une population de cellules persistantes au traitement. Ces cellules ont ensuite été soumises à des tests de prolifération (MTT et test clonogénique) afin d’étudier leur sensibilité à un inducteur de la ferroptose (RSL3).
Deuxièmement, nous avons évalué la potentielle implication des différents acteurs de la ferroptose. Nous avons quantifié l’expression des protéines impliquées dans la régulation de la ferroptose (GPX4, NRF2, Xc-) grâce à la réalisation de western blots. Ensuite, nous avons mesuré le stress oxydant dans nos cellules persistantes. Grâce à la cytométrie en flux, nous avons mesuré les quantités de ROS dans les cellules traitées au Dabrafenib/Trametinib. Un dosage du GSH a également été réalisé. En effet, comme mentionné précédemment, le GSH permet à GPX4 de réduire les lipides peroxydés en leurs alcools correspondants et donc d’éviter la ferroptose. Une diminution de la production de GSH pourrait arrêter l’activité de GPX4 et entrainer la ferroptose par accumulation des lipides peroxydés.
Enfin, grâce à la cytométrie en flux, nous avons mesuré les quantités de lipides neutres et de lipides peroxydés dans les cellules traitées au Dabrafenib/Trametinib. En effet, les lipides représentent le substrat de l’oxydation induisant la ferroptose et jouent donc un rôle important dans ce processus. | Nom de la société/Institution/Lieu de stage : | GIGA-Cancer - ULiège | Année académique : | 2021-2022 | Maître de Stage : | Nokin, Marie Julie | Promoteur : | Ghuysen, Marie-Françoise | Etudes : | Technologue de laboratoire médical |
Evaluation de la sensibilité à la ferroptose dans les cellules d’adénocarcinome pulmonaire muté BRAFV600E après traitement au Dabrafenib et au Trametinib [TFE] / Océane Muller, Auteur . - Angleur : HELMo Sainte-Julienne, 2022 . - 42 p. : ill. couleur. TFE (Travail de Fin d'Etudes) -- Bachelier-Technologue de laboratoire médical -- HELMo Sainte-Julienne, Angleur, 2022 Langues : Français ( fre) Résumé : | Des résultats préliminaires obtenus au Laboratoire d’accueil ont montré que des cellules d’adénocarcinome pulmonaire muté BRAFV600E persistantes au Dabrafenib/Trametinib sont plus
sensibles à l’induction de la ferroptose que les cellules non traitées (parentales). Ces résultats ont été obtenus en exposant des cellules HCC364 à des inducteurs de la ferroptose après un traitement de 3 semaines aux inhibiteurs de BRAF et de MEK.
Le but de mon travail a été d’évaluer si la sensibilité à la ferroptose est une caractéristique générale des cellules de cancer du poumon BRAF muté après traitement au abrafenib/Trametinib.
Les objectifs de ce travail sont divisés en deux parties.
D’une part, nous avons évalué si une autre lignée de cancer du poumon BRAF muté, les cellules Piro 1D, sont également plus sensibles à l’induction de la ferroptose après traitement avec la combinaison de Dabrafenib et Trametinib que les cellules parentales.
D’autre part, nous avons étudié les potentiels mécanismes intervenant dans l’augmentation de la sensibilité à la ferroptose.
Premièrement, les cellules Piro 1D ont été traitées avec une combinaison de Dabrafenib et de Trametinib durant trois semaines afin d’obtenir une population de cellules persistantes au traitement. Ces cellules ont ensuite été soumises à des tests de prolifération (MTT et test clonogénique) afin d’étudier leur sensibilité à un inducteur de la ferroptose (RSL3).
Deuxièmement, nous avons évalué la potentielle implication des différents acteurs de la ferroptose. Nous avons quantifié l’expression des protéines impliquées dans la régulation de la ferroptose (GPX4, NRF2, Xc-) grâce à la réalisation de western blots. Ensuite, nous avons mesuré le stress oxydant dans nos cellules persistantes. Grâce à la cytométrie en flux, nous avons mesuré les quantités de ROS dans les cellules traitées au Dabrafenib/Trametinib. Un dosage du GSH a également été réalisé. En effet, comme mentionné précédemment, le GSH permet à GPX4 de réduire les lipides peroxydés en leurs alcools correspondants et donc d’éviter la ferroptose. Une diminution de la production de GSH pourrait arrêter l’activité de GPX4 et entrainer la ferroptose par accumulation des lipides peroxydés.
Enfin, grâce à la cytométrie en flux, nous avons mesuré les quantités de lipides neutres et de lipides peroxydés dans les cellules traitées au Dabrafenib/Trametinib. En effet, les lipides représentent le substrat de l’oxydation induisant la ferroptose et jouent donc un rôle important dans ce processus. | Nom de la société/Institution/Lieu de stage : | GIGA-Cancer - ULiège | Année académique : | 2021-2022 | Maître de Stage : | Nokin, Marie Julie | Promoteur : | Ghuysen, Marie-Françoise | Etudes : | Technologue de laboratoire médical |
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